內容簡介
《玉米品種DNA指紋鑒定技術研究與應用》講解玉米品種純度和真僞檢測所必備的理論基礎知識,培訓基本操作技能,在理解和熟悉的基礎上,提高讀者的實際檢測水平,達到最終能夠勝任種子質量檢測工作的目的。《玉米品種DNA指紋鑒定技術研究與應用》可作為玉米種子質量檢測、品種管理、品種權保護、侵權案司法鑒定、品種選育、農業科研教育等從業人員的參考書籍。
目錄
第一章 玉米種子質量鑒定技術的發展
第一節 玉米種子質量及種子質量檢測的重要性
第二節 主要的種子鑒定技術
一、常規鑒定技術
二、現代鑒定技術
第三節 分子技術在玉米品種鑒定中的發展趨勢
一、從RAPD標記到SSR標記的技術提升
二、從SSR標記到SNP標記的技術探索
三、從非功能標記嚮功能標記的轉變
第二章 玉米品種DNA指紋鑒定標準試驗體係的建立
第一節 DNA提取方法的研究
一、DNA提取的基本方法及原理
二、DNA快速提取方法研究——堿煮法
三、高質量DNA提取方法研究——改良高鹽低pH法
四、果皮組織DNA提取方法研究
第二節 PcR擴增反應程序和反應體係的研究
一、通用PCR擴增反應程序的建立
二、多重PCR擴增體係的建立
第三節 電泳檢測方法的研究
一、主要電泳檢測方法的比較
二、PAGE/快速銀染檢測法的研究
三、毛細管電泳多色熒光檢測與變性PAGE電泳銀染檢測兩種檢測方法的比較
四、毛細管電泳熒光檢測中的異常電泳類型及原因分析
第三章 核心引物的篩選確定及復閤擴增體係的建立
第一節 玉米DNA指紋鑒定中核心引物組閤法的確立
一、特徵譜帶法、引物組閤法和核心引物組閤法的概念
二、特徵譜帶法、引物組閤法和核心引物組閤法的比較研究
第二節 玉米通用SSR核心引物篩選及高通量多重PCR復閤擴增體係建立
一、研究目的
二、研究思路
三、核心引物的篩選
四、核心引物的重新設計
五、熒光多重PCR組閤的建立
第四章 玉米DNA指紋庫數據統計及建庫標準化規範
第一節 DNA指紋庫數據的統計
一、建庫SSR引物基本信息
二、原始數據統計記錄方式
三、原始數據導入數據庫的方式
第二節 玉米DNA指紋數據庫建庫標準化規範的建立
一、標記方法及標記來源
二、檢測平颱
三、試劑質量保證
四、樣品的來源及性質
五、引物及流程的評估
六、不同來源數據的有效整閤
七、構建品種DNA指紋模式庫
八、構建品種DNA指紋擴展庫
九、數據庫數據的隨機盲測
第五章 玉米DNA指紋數據庫管理係統的建立
第一節 數據信息錶的整理
一、信息類資料
二、數據類資料
三、圖片類資料
第二節 分析功能的設計及實現
一、主要功能及定義
二、品種查詢比較功能的設計
三、親子鑒定功能的設計
四、品種指紋圖譜繪製功能的設計
五、一緻性鑒定功能的設計
六、純度鑒定功能的設計
第三節 網站用戶權限分類及設計
第四節 未來發展戰略規劃
一、建立玉米DNA指紋國際聯閤數據庫及管理係統
二、建立DNA指紋數據庫、分子標記輔助育種、單倍體育種技術三位一體的高效玉米育種技術體係
第六章 DNA指紋技術在玉米品種純度、一緻性、特異性鑒定中的研究及應用
第一節 DNA指紋技術在玉米品種純度鑒定中的應用研究
一、玉米雜交種純度鑒定核心引物的選擇標準
二、特定品種純度鑒定特異引物選擇標準
三、雙親互補帶型——適於玉米雜交種純度鑒定的譜帶類型
四、玉米雜交種純度鑒定具體工作流程
第二節 DNA指紋技術在玉米品種一緻性鑒定中的應用研究
一、一緻性檢測中異型帶的類型
二、不同品種、不同位點一緻性分布特徵
三、一緻性檢測標準的製定
四、造成品種一緻性差的原因分析
第三節 DNA指紋技術在玉米品種特異性鑒定中的應用研究
一、現行的形態DUS測試係統麵臨的問題
二、分子技術在玉米特異性測試中的應用策略
三、分子測試標準的製定
四、需探討的幾個問題
第四節 DNA指紋技術在玉米品種區域試驗中的應用
一、我國玉米區域試驗品種DNA指紋檢測工作曆程
二、玉米區域試驗品種DNA指紋檢測工作特點
三、DNA指紋監控工作值得思考的幾個問題
四、玉米區試DNA指紋檢測工作的意義
五、關於加強品種市場管理的對策建議
第七章 玉米品種實驗室鑒定技術具體操作程序
第一節 玉米SSR標記鑒定技術
一、DNA提取
二、PCR擴增
三、電泳檢測
第二節 玉米種子清蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定技術
一、實驗目的
二、儀器設備與試劑
三、溶液配製
四、電泳操作技術
第三節 玉米種子酯酶同工酶等電聚焦電泳
一、實驗目的
二、儀器設備與試劑
三、溶液配製
四、電泳操作技術
附錄 法規文件匯編
國傢玉米品種試驗DNA指紋鑒定管理辦法
玉米品種鑒定DNA指紋方法(NY/T1432—2007)
國傢區試玉米品種一緻性及真實性DNA指紋檢測技術
農作物種子質量監督抽查管理辦法
最高人民法院關於審理侵犯植物新品種權糾紛案件具體應用法律問題的若乾規定
農業植物新品種權侵權案件處理規定
北京市高級人民法院關於印發《北京市高級人民法院關於知識産權司法鑒定若乾問題的規定(試行)》的通知
農作物種子質量糾紛田間現場鑒定辦法
北京市種子管理站行政處罰條例
DNA指紋圖譜測試指南:分子標記選擇和數據庫構建(概要)
中華人民共和國種子法
農業轉基因生物安全管理條例
中華人民共和國植物新品種保護條例實施細則(農業部分)
主要農作物品種審定辦法
農業植物品種命名規定
主要參考文獻
精彩書摘
第一章 玉米種子質量鑒定技術的發展
第一節 玉米種子質量及種子質量檢測的重要性
玉米是我國主要的糧食、飼料及工業原料作物。常年播種麵積已達到3 000萬hm2,産量占糧食作物總産量約30%,年製種量超過10億kg,其中雜交玉米已達95%以上。玉米在我國農業生産中占有舉足輕重的地位。
種子質量(seed quality)是綜閤評價商業種子的不同特性,以此來判定其優劣而形成的一種概念。與籽粒品質(grain quality)不同,種子質量包括品種質量(genetic’quality)和播種質量(seeding quality)。品種質量是指與遺傳特性有關的品質,主要用以錶達種子內在的價值,可用真、純兩個字概括。真是指種子真實可靠的程度,可用真實性錶示;純是指品種典型一緻的程度,可用品種純度錶示。播種質量是指種子播種後與田問齣苗有關的質量,主要用以錶達種子外在的價值,可用淨、壯、飽、健、乾、強6個字概括。淨是指種子清潔乾淨的程度,可用淨度錶示;壯是指種子發芽齣苗齊壯的程度,可用發芽力、生活力錶示;飽是指種子充實飽滿的程度,可用韆粒重和容重錶示;健是指種子健康的程度,通常用種子病蟲感染率錶示;乾是指種子乾燥耐儲藏的程度,可用種子水分百分率錶示;強是指種子強健,抗逆性強,增産潛力大,通常用種子活力錶示(顔啓傳,2001)。目前,在國傢標準乃至國際標準中,往往采用種子純度、淨度、發芽率、水分這4項指標來衡量種子質量並以此定級。在這4項指標中,尤以種子純度最為重要。
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前言/序言
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