生命科学实验指南系列：精编分子生物学实验指南（第5版 套装上下册） 下载 mobi epub pdf 电子书 2024

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内容简介

　　《生命科学实验指南系列：精编分子生物学实验指南（第5版 套装上下册）》是知名度很高、不断更新的《Current Protocols in Molecular Biology》系列的精编版本。新版对原有内容进行了修订和更新，包括：大肠杆菌、质粒和噬菌体，DNA的制备和分析，DNA和RNA的酶学操作，RNA的制备和分析，重组DNA文库的构建，重组DNA文库的筛选，DNA序列测定，克隆化DNA的诱变，DNA导入哺乳动物细胞，蛋白质分析，免疫学，DNA-白质相互作用，酿酒酵母，原位杂交和免疫组织化学，聚合酶链反应，蛋白质的表达，蛋白质磷酸化的分析，生物信息学，蛋白质相互作用的分析等；又新增了染色质的装配与分析，核酸阵列，组合文库的建立和使用，单个细胞或一群细胞间差异表达基因的发现和分析四章内容。
　　《生命科学实验指南系列：精编分子生物学实验指南（第5版 套装上下册）》可供高等院校和科研机构从事分子生物学研究的科研工作者和研究生参考。

内页插图

目录

译者序
前言

第1章 大肠杆菌、质粒和噬菌体
1．1 培养基的制备及细菌学工具
1．1．1 极限培养基
1．1．2 丰富培养基
1．1．3 固体培养基
1．1．4 实验工具
1．2 在液体培养基中培养
1．2．1 基本方案1过夜培养
1．2．2 基本方案2大体积培养
1．2．3 基本方案3利用计数板监测生长情况
1．2．4 基本方案4利用分光光度计监测生长情况
1．3 固体培养基上培养
1．3．1 基本方案1通过连续稀释法滴定和分离细菌菌落
1．3．2 基本方案2通过平板划线法分离单菌落
1．3．3 基本方案3通过铺平板分离单个菌落
1．3．4 基本方案4影印平板
1．3．5 辅助方案菌株的保存和复苏
1．4 经典细菌遗传学选论
1．5 质粒载体
质粒载体的选择
1．6 质粒DNA的小量制备
1．6．1 基本方案1碱裂解小量制备
1．6．2 备选方案96孔微量滴定板碱裂解法
1．6．3 基本方案2煮沸小量制备法
1．7 质粒DNA的大量制备
1．7．1 基本方案1碱裂解法制备粗制裂解物
1．7．2 基本方案2氯化铯／溴化乙锭平衡离心法
1．7．3 备择方案利用阴离子交换层析或分子筛层析纯化质粒DNA
1．8 将质粒DNA导入细菌细胞
1．8．1 基本方案CaCl2转化法
1．8．2 备择方案一步法制备和转化感受态细菌
1．8．3 基本方案2高效率的电转化方法
1．9 入噬菌体概述
1．9．1 裂解性生长
1．9．2 溶源性生长
1．10 作为克隆载体的入噬菌体
1．10．1 用入噬菌体的优点
1．10．2 选择插入的DNA
1．10．3 入噬菌体来源的克隆载体的图谱
1．11 入噬菌体铺平板产生噬斑
1．11．1 基本方案1通过连续稀释法分离单个噬斑
1．11．2 基本方案2噬菌体转染和体外包装构建
1．12 培养入衍生的噬菌体载体
1．12．1 基本方案通过平板裂解制备噬菌体库
1．12．2 备择方案制备液体裂解物
1．13 从噬菌体裂解液中制备入DNA
基本方案通过分级平衡梯度离心制备DNA
1．14 源于丝状噬菌体的载体
1．15 利用M13噬菌体衍生载体制备单链DNA
基本方案利用辅助噬菌体从质粒制备单链DNA

第2章 DNA的制备和分析
电泳及其应用
凝胶和电路
2．1 水溶液中DNA的纯化和浓缩
2．1．1 基本方案DNA的酚抽提和乙醇沉淀
2．1．2 备择方案1异丙醇沉淀DNA
2．1．3 辅助方案1丁醇浓缩DNA
2．1．4 辅助方案2醚抽提法去除残存酚、氯仿或丁醇
2．1．5 备择方案2硅膜离心柱法纯化DNA
2．1．6 备择方案3RNA及DNA稀溶液的纯化和浓缩
2．1．7 备择方案4乙醇沉淀法去除低分子质量的寡核苷酸和核苷三磷酸
2．2 阴离子交换色谱法纯化DNA
基本方案
2．3 从哺乳动物组织中制备基因组DNA
基本方案
2．4 从植物组织中制备基因组DNA
2．4．1 基本方案氯化铯离心法制备植物DNA
2．4．2 备择方案CTAB制备植物DNA
2．5 从细菌中制备基因组DNA
2．5．1 基本方案细菌基因组DNA的小量制备
2．5．2 备择方案氯化铯法大规模制备细菌基因组DNA
……
第3章 DNA和RNA的酶学操作
第4章 RNA的制备和分析
第5章 重组DNA文库的构建
第6章 重组DNA文库的筛选
第7章 DNA序列测定
第8章 克隆化DNA的诱变
第9章 DNA导入哺乳动物细胞
第10章 蛋白质分析
第11章 免疫学
第12章 DNA-蛋白质相互作用
第13章 酿酒酵母
第14章 原位杂交和免疫组织化学
第15章 聚合酶链反应（PCR）
第16章 蛋白质的表达
第17章 蛋白质磷酸化的分析
第18章 生物信息学
第19章 蛋白质相互作用的分析
第20章 染色质的装配与分析
第21章 核酸阵列
第22章 组合文库的建立和使用
第23章 单个细胞或一群细胞间差异表达基因的发现和分析

附录
索引

前言/序言

　　分子生物学已经发展成熟，并且实验研究已经进展到如此状态——以前特殊的实验程序，现在已成为常规操作——因此，《精编分子生物学实验指南》（Short Protocols in Molecular Biology，以下简称《精编》）的范围和概念也在不断改变。某些内容一度被认为对一般的读者显得过于复杂，如组合化学或染色质装配和分析，现在已被有规律地应用。基于这样的思考，我们增加了新的章节，并扩展了《精编》原有主题下的内容。
　　与前面的版本一样，两卷本的《精编分子生物学实验指南》第五版是已出版的《最新分子生物学实验方法汇编》（Current Protocols in Molecular Biology，以下简称《汇编》）一书中的实验方法的简编版本。它由《汇编》的核心手册和每季度更新的服务手册中提炼而来，涵盖了《汇编》中所有基本方法及其详细实验步骤。本书拟作为实验室手册使用，对象是那些熟悉《汇编》中各种详细解释的研究生和博士后人员，然而，在本书中对实验方法有详细的步骤说明，有经验的研究人员也可将本书作为独立的实验室操作指南。
　　虽然熟练掌握本书中的技术方法可使读者进行分子生物学和相关学科研究，但本书并不适用于替代研究生水平的分子生物学教材或作为这一领域的综合性读本。另外，我们推荐读者在使用本书时要对照参考《汇编》中的评述和详细注释。最后，我们极力要求读者通过在分子生物学实验室中的工作获得关于基本技术和实验室安全操作规程的第一手经验。
　　如何使用这本书
　　结构
　　本书按章编排，每种实验方案均可从各节中获得。每一节中列出材料、实验方案的步骤和每种技术的参考文献。在附录5中囊括了整本书全部的参考文献。本书的排列和结构与《汇编》基本一致。尽管各节的编号可能不完全相对应，但各节的标题在两个版本中是相同的。因此，拥有两种版本的使用者当需要更详细的解释时会发现对照参考《汇编》十分容易和便利。
　　在整本书中，许多试剂和实验程序被反复应用，不过我们并不是反复复制这些信息，而是在章节之间广泛地进行对照参考。书中前面各章（和附录3）主要介绍常用的技术方法，如基本微生物学和酶、DNA、RNA的基本操作方法，而后面的各章介绍的是更先进的技术方法。因此，在一种方案中无论什么时候用到某一特定的酶，均可对照参考第3章中适当的节，找到介绍该酶反应条件的内容（如3.5介绍逆转录酶）。同样，在整本书中读者可参照1.3铺平板或在平板上划线；参照2.1进行酚抽提和乙醇沉淀；参照2.6进行琼脂糖凝胶电泳等。因此，在本书的后面章节所介绍的方案中就省略了制备、纯化和分析样品或目的分子的辅助程序。
　　附录提供了试剂和溶液的配方（附录1），有用的测量值和数据（附录2），常用的生物化学实验技术（附录3），供应商的名称和地址（附录4）。
　　方案
　　许多节中都含有几组方案。在每个节中首先出现的是基本方案，它一般也是首选的实验方法。备择方案在以下情况下使用：①使用不同的仪器或试剂可得到相似的结果；②起始材料需要方法有所改变；③对最终产物的要求与基本方案不同。辅助方案介绍了基本方案和备择方案所需的附加步骤。这些步骤之所以从核心方案中单列出来，是因为它们可能在本书中具有其他用途，或操作时与基本方案各步骤在时间上可以分开。
　　试剂与溶液
　　实验步骤开始之前，材料栏中列出了一个方案中所需要的各种试剂。除培养基和限制性内切核酸酶反应缓冲液配方外，相应的配方都在附录1中列出，并在括号中列出了这些配方的出处。尤其要注意这些特殊溶液中有些溶液的名称在一个节与另一个节中可能是相似的（如杂交液、裂解缓冲液等），但配方却不同；因此，在按适当的配方配制试剂时要仔细确认。为了避免混淆，在附录1中紧接每个试剂名称的括号内列出了使用每个配方的节序数，但常用缓冲液和溶液除外，如TE缓冲液、PBS。
　　【注】本书中实验方案中所使用的，以及所有试剂和溶液制备所使用的水，均应为去离子蒸馏水。仪器
　　现代分子生物学实验室中标准仪器及相关用品在本文后列出，并在本书中广泛采用。在每个方案之前的材料栏中仅包括“特殊”仪器，即在实验室不易备有的或需要特殊制备的仪器。
　　供应商
　　在本书的某些实验中，我们推荐一些化学试剂、生物材料或实验仪器的供应商。但我们尽量避免这种做法，因为对某种品牌的喜好是主观的，而且一般并无广泛比较试验的基础。对所推荐的供应商，我们的原则是：这种特殊品牌实际上已被证实具有出众的品质；或者，这种材料在市场上很难找到。附录4列出了推荐的供应商的名称、地址和电话号码，但它们并非唯一的生物试剂供应商。读者也可使用自己喜好的品牌进行实验。
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